熒光定量PCR儀在國(guó)內(nèi)市場(chǎng)推廣從98年開(kāi)始已經(jīng)經(jīng)歷了6年，從開(kāi)拓者PE（ABI）到ROCHE,再到后來(lái)魚(yú)龍混雜

                所謂real-time Q-PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基因，利用熒光信號(hào)累積實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀 采購(gòu)要領(lǐng)！

        目前購(gòu)買(mǎi)熒光定量PCR儀系統(tǒng)，一般包括：

        實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀 +實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀 開(kāi)機(jī)檢測(cè)試劑+通用電腦+自動(dòng)分析軟件  

        熒光定量PCR儀 組成：溫控模塊、光學(xué)系統(tǒng)（光源、檢測(cè)器、光路傳導(dǎo)） 

采購(gòu)要領(lǐng)

1、 溫控模塊/Peltier：

       普通的Peltier加熱方式具有明顯邊緣效應(yīng)，均一性差，是上一代的模塊PCR加熱技術(shù)，正處于被淘汰的邊緣。

       目前最好的溫控模塊：銀，在金屬中銀的導(dǎo)熱性能較高，升降溫速度快，孔間溫度均一性好，邊緣效應(yīng)相應(yīng)減少

         金屬的熱傳導(dǎo)系數(shù)表： 

         銀 429 ＞銅 401 ＞ 金 317 ＞鋁 237  ＞鐵 80 ＞錫 67  ＞ 鉛 34.8

另：

       單一模塊升降溫速度高并不代表樣本升降溫速度也高，因此在溫控模塊升降溫速度對(duì)比中，最終是要看樣本的升降溫速度是否快

       最大升降溫速度不等與平均升降溫速度

2、  光源：

       光強(qiáng)比較：髙強(qiáng)度白光LED ＞ 鹵鎢燈 ＞單色LED

       白光LED的亮度約是鹵鎢燈的3倍左右，單色LED的10倍左右，能夠捕捉到更多的熒光信號(hào)，是專(zhuān)業(yè)光源領(lǐng)域的最新技術(shù)代表，2011年開(kāi)始普遍應(yīng)用于專(zhuān)業(yè)儀器，無(wú)論光強(qiáng)、靈敏度與均一性可與上一代氙燈光源媲美，且壽命提升了10倍以上。

鎢燈燈絲本身存在閃爍不穩(wěn)定的問(wèn)題，其激發(fā)能量遠(yuǎn)低于白光LED，事實(shí)上，無(wú)需高端品牌汽車(chē)的旗艦概念車(chē)，如豐田雷克薩斯，已經(jīng)開(kāi)始使用白光LED作為車(chē)頭燈。

       壽命比較：髙強(qiáng)度白光LED = 單色LED  ＞鹵鎢燈

       白光LED的壽命長(zhǎng)達(dá)10000小時(shí)以上，一般可以使用5-10年左右，基本上超過(guò)了一般科研儀器的正常工作壽命，基本終身無(wú)需更換光源，而鹵鎢燈光源基本每2年就要更換一次，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，南方更是不足一年就要更換一次

另：

鹵鎢燈每次運(yùn)行需要半小時(shí)預(yù)熱，其中累計(jì)散發(fā)的熱量對(duì)熒光具有明顯的淬滅作用。

3 、 檢測(cè)器：

 熒光定量PCR靈敏度：冷CCD ＞CCD ＞光電倍增管 CPM  ＞光電二極管

        CCD作為熒光信號(hào)的接受器，其質(zhì)量直接決定了儀器的檢測(cè)靈敏度和穩(wěn)定性。

10℃的冷CCD，和常溫CCD有著質(zhì)的區(qū)別，在專(zhuān)業(yè)光學(xué)領(lǐng)域，冷CCD的造價(jià)成本至少要比常規(guī)CCD高出一倍以上。冷CCD在更低的溫度下進(jìn)行光信號(hào)捕捉，能夠提供更高的光感靈敏度和更低背景噪音。因此，有的熒光定量PCR能夠穩(wěn)定區(qū)分1000和2000拷貝的濃度差異，而有的只能做到區(qū)分5000和10000個(gè)拷貝數(shù)。

4 、光路傳導(dǎo)：：

         光路的傳導(dǎo) 光路設(shè)計(jì)應(yīng)盡可能有效消除邊緣效應(yīng)，光路設(shè)計(jì)是否有效消除邊緣效應(yīng)，只有實(shí)驗(yàn)才能檢驗(yàn)

         檢驗(yàn)方法：96/384孔板中及四角各布置標(biāo)準(zhǔn)品，看差異

         其中     

         a 光源直接照射微孔板上：邊緣效應(yīng)明顯

         b 逐孔移動(dòng)式采光：無(wú)邊緣效應(yīng)，但需時(shí)常校正 

         c 散射采光：邊緣效應(yīng)較明顯，切換光源時(shí)需要光源組件移動(dòng)